[식품공전] 대장균군 정성시험 압축 정리.

유당배지법

유당배지(Lactose broth)를 이용하여 추정시험 -> 확정시험 ->완전시험 3단계로 진행한다.

* 대장균군 정성시험법에서 사용되는 Lactose broth 는 2배농도, 1배 농도가 필요하다.

* 대장균군 정성시험법에 사용되는 배지는 가스를 포집할 수 있는 듀람관이 들어있어야 한다.

 

@Lactose broth

추정시험

(1) 225ml 희석액(Saline) + 25g 검체를 균질화 하여 시험용액으로 사용한다.

(2) 시험용액을 2배 농도 Lactose broth에 10ml 접종한다.

(3) 시험용액을 1배 농도 Lactose broth에 1ml, 0.1ml을 접종한다.

* (2), (3) 번은 각각 3개씩 접종하여 만든다.

(4) 시험용액을 접종한 Lactose broth는 35도에서 24시간 배양한다.

(5) 배양 후 듀람관에 가스가 포집되어 있으면 대장균군 추정양성이므로 확정시험을 실시한다.

(6) 배양 후 듀람관에 가스가 없다면 48시간 까지 추가 배양 후 음성판정한다.

 

확정시험

확정시험에서는 듀람관이 들어있는 BGLB 배지를 사용한다.

(1) 추정시험에서 가스가 발생한 Lactose broth를 1ml 채취하여 BGLB에 접종한다.

(2) BGLB는 35도에서 24시간 배양한다.

(3) 추정시험과 동일하게 듀람관에 가스가 포집되지 않았다면 48시간 까지 추가 배양 후 음성판정.

(4) 듀람관에 가스가 포집되었다면 Endo agar 또는 EMB agar에 분리배양한다.

* 주로 EMB agar가 많이 쓰이고 있다.

(5) 분리배양한 EMB agar는 35도에서 24시간 배양을 진행한다.

(6) 배양 후 EMB 전형적인 집락이 발생되면 확정시험 양성으로 판정 후 완전시험을 진행한다.

* BGLB 추가 배양 이후 배지의 색이 갈색으로 되었다면 무조건 양성시험을 실행해야 한다.

 

완전시험

(1) 확정시험에서 집락이 나온 EMB배지를 사용한다

(2) 전형적인 집락을 2개이상 Nutrient agar에 접종한다.

(3) Nutrient agar는 35도에서 24시간 배양한다.

(4) 배양 후 집락에 대해서 그람음성, 무아포성 간균이 증명되면 양성판정하며 결과적으로 대장균군 양성으로 판정한다.

 

BGLB법

유당배지법의 확정시험부터 진행하면 된다.

 

데스옥시콜레이트 유당한천 배지법 (DCLA법)

(1) 225ml 희석액(Saline) + 25g 검체를 균질화하여 시험용액으로 사용한다.

(2) DALA 또는 VRBA 배지에 1ml 씩 접종 후 응고시킨다

(3) 접종 후 35도에서 24시간 배양한다.

(4) 배양 후 의심스러운 집락을 2개이상 EMB agar 또는 MacConkey agar 에 분리배양한다.

(5) 이후 과정은 유당배지법 완전시험과 함께 진행하여 대장균군 유무를 판단한다.